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蜀科离心机在中药研究中的应用

发布时间:2017-01-12      点击次数:1596

摘要:研究丹参酮IIA、隐丹参酮和丹参酮I组合物(组合物)在斑马鱼体内的代谢,探讨斑马鱼用于中药多组分代谢研究的可行性及合理性。

方法

2.1分组与给药

取斑马鱼成鱼,平均分成2组,每组5条,分别置于30 mL含有1% DMSO纯净水(空白鱼组)、含丹参酮IIA、隐丹参酮和丹参酮I组合物(丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I质量浓度分别为1.57、1.02、2.09μg/mL)的1% DMSO纯净水溶液(给药鱼组)棕色瓶中,同时设空白药物组(组合物1% DMSO纯净水溶液)。

2.2样品采集与处理

给药鱼组分别于斑马鱼暴露药液后0、1、2、4、6、8、12、18、24 h取药液4 mL各2份,24 h将鱼取出,用纯净水迅速洗涤3次,杀掉,去除鱼鳍和鱼磷,称质量,于−70 ℃冰箱放置。各时间点斑马鱼药液各2份分别混合,于−70 ℃冰箱放置。空白药物组于斑马鱼暴露药液后0、24 h时同法取样。将不同时间点取出的斑马鱼药液冷冻干燥,残渣加0.5 mL甲醇溶解,过0.22 μm滤膜,滤液20 μL进行HPLC-MS分析。取24 h空白鱼组和给药鱼组斑马鱼,混合,剪碎,称取1 g,加5 mL生理盐水匀浆,用蜀科高速冷冻离心机3 500 r/min离心10 min,上清液用等体积醋酸乙酯萃取3次,合并萃取液,氮气吹干,残渣加1 mL甲醇溶解制成1 g/mL的溶液,过0.22 μm滤膜,滤液20 μL进行HPLC-MS分析。

结果

组合物经斑马鱼作用后,产生丹参酮IIA和隐丹参酮的羟基化和脱氢产物,未发现丹参酮I的代谢产物。

结论

斑马鱼对组合物的代谢与大鼠或鼠肝微粒体的代谢机制高度一致,提示斑马鱼对该组合物的代谢具合理性,且具有化合物用量少、成本低、简单、等优点,为斑马鱼用于复杂的中药体系代谢研究提供依据。

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