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低速离心机在中性粒细胞磁珠分选中的应用

发布时间:2018-07-25      点击次数:1811

试剂耗材及设备:磁力分选器,磁柱,CD15磁珠试剂盒,磁珠分选缓冲液50ml,RP1640,1ml 枪及枪头,20微升枪与枪头,蜀科低速离心机,15ml离心管4支,细胞计数板。 
步骤: 
1. 制冰,保证磁力分选器可以放入冰盒内操作,在4-8℃内进行分选;  
2. 配液磁珠分选缓冲液(50ml PBS液中含2mmol/L EDTA,0.5%BSA,PH=7.2);  
3. 将上步初步分选的中性粒细胞悬液用蜀科低速离心机300g离心10分钟,去上清; 
4. 细胞重悬于磁珠分选缓冲液中,107细胞重悬于80微升缓冲液中;(如细胞数多按倍数增加) 
5. 107细胞中加入20微升CD15磁珠;充分混匀放入2-8℃避光孵育15分钟; 
6. 用1-2ml缓冲液洗涤细胞/107细胞,再次用蜀科
低速离心机300g离心10分钟,去上清; 

7. 重悬细胞于缓冲液中,108细胞重悬于500微升缓冲液中; 
8. 将磁力分选器置于冰盒中,用3ml缓冲液冲洗磁柱; 
9. 将含有中性粒细胞的缓冲液加入磁柱中; 
10. 用缓冲液冲洗磁柱,每次3ml,冲洗3次;  
11. 除去磁场,把磁柱放置于15ml离心管上,用5ml缓冲液加压快速冲洗磁柱; 
12. 离心管中收集的便是中性粒细胞;  
13. 后用蜀科
低速离心机300g离心去上清,重悬细胞于10ml细胞培养液中,细胞计数。

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