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台式低速冷冻离心机提取细胞质和细胞核蛋白离心详细步骤

发布时间:2021-09-08      点击次数:57
   台式低速冷冻离心机,转速一般不超过4000r/min,最大容量为2~4L,是实验室于大量初级分离提取生物大分子、沉淀物等。其转头多用铝合金制的甩平式和角式两种,离心管有硬质玻璃、聚乙烯硬塑料和不锈钢管多种型号。离心机装配有驱动电机、定时器、调整器(速度指示)和制冷系统(温度可调范围为-20~+40℃),可根据离心物质所需,更换不同容量和不同型号转速的转头。
  台式低速冷冻离心机提取细胞质和细胞核蛋白离心详细步骤:
  1.决定细胞生长状态,细胞生长状态应该是80%或者更好:
  2.用离心机以1500r/min离心5min
  3.弃上清液,用等体积的冷PBS洗细胞,像步骤2那样,反复3次
  4.根据估计的沉淀量加入5倍体积的isotoniclysisbuffer到细胞颗粒中,使细胞温和悬浮,尽量避免泡沫
  5.加入裂解液lysisbuffer在悬浮的细胞中,并放在冰上15min让细胞膨胀,可以通过显微镜检查
  6.对于细胞实验中膨胀的细胞,加入10%的IGEPALCA-630使最后的浓度达到0.3%,混匀,加的时候要温和
  7.立即离心(量大的可以用1.5ml的EP管,以5500r/min离心30s;量大的可以用50ml的管子以5500r/min离心2min)
  8.转移上清液(细胞质蛋白)到一个新的冷冻管中
  9.用悬浮颗粒5倍体积的isotoniclysisbuffer悬浮细胞,并混匀
  10.用离心机离心细胞悬浮液,以1500r/min离心5min,移掉上清液
  11.用2/3倍体积的extractionbuffer悬浮颗粒
  12.把管子放置在震荡混匀器上,以700r/min,15min震荡混匀,接着以1400r/min,15min,整个过程要仔细,避免泡沫产生
  13.以9400r/min离心15min,低温离心完后转移上清液到一个新的冷冻离心管中
  14.分成几份用液氮冷冻,并且保存起来(长期保存应放在-80℃上,短期保存要放在-20℃上)

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