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细胞核的分离

发布时间:2014-05-21      点击次数:2405

   研究细胞核及其组成成分,如染色质、DNA、核内小RNA以及各种复制和转录酶等,需分离制备细胞核。
    真核细胞的细胞核为有膜细胞器,所分离的细胞核要保持核膜的完整性,核内成分不外漏,核外细胞质成分不内渗或敖附在核膜上。通常用于分离细胞核的方法有3种,即有机溶剂法、蔗糖法和柠檬酸法。有机溶剂能阻止细胞质的某些成分进入细胞核内,但不能保持细胞核的正常形态,且可导致核内一些酶的失活,常用于定量分析细胞核的生化成分及其他一些特殊目的。蔗糖高速离心法较简单,适用面广,核纯度高,保持生物活性,但要用高速离心机和较大量的蔗糖。柠檬酸法属差速离心法,只需低速离心机,细胞质成分污染程度低,核破碎率也较低,蔗糖用虽较小,应用广泛。
    一、蔗糖高速离心法
    将组织匀浆中细胞核游离出来,再经过蔗糖密度梯度离心,将细胞核沉淀下来。蔗糖为低渗透压介质,能防止细胞核自溶。在梯度液中含有Ca2+,能减少细胞核的脆性。
    二、柠檬酸低速离心法
    取组织在一定浓度的柠檬酸溶液中匀浆,通过差速离心将沉降系数较大的细胞核先沉淀下来。柠檬酸能除去纫胞质里的酸溶性蛋白,整合二价阳离子,抑制核酸酶,减少校的破碎。

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