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医用离心机“肾单层细胞培养”案例
发布时间:2016-05-06   点击次数:1012次

  蜀科医用离心机系列产品包含高速离心机,低速离心机,大容量离心机,冷冻离心机等,广泛应用于制药、临床医学、血站血库、检验检疫、疾控等科研和生产单位。

 下面简单介绍通过医用离心机进行“肾单层细胞培养”的一般操作技术。

1.取肾:用无菌操作取出断乳前后幼龄动物的肾脏置灭菌平皿中,剪去留的被膜和脂肪,并纵向切成两半,剪去肾的被膜和脂肪,并纵向切成两半,剪去肾盂及髓质部分,用含双抗(指青、链霉素,下同)的汉克氏液洗净,移置小烧杯中,剪成乳糜状,再用汉克氏液洗2—3次,至液体澄清无血细胞为止。

2.消化;加入10倍的0.125%胰酶液进行消化。有热消化法(在37℃水浴中)和冷消化法(在4℃冰箱中)两种。消化的时间根据不同的组织细胞和所用胰酶的活性而定,直至聚成絮状的肾组织又分散开。取出倾去胰酶,用汉克氏液洗涤数次,然后加入少量乳汉液,用吸管进行吹打(即吸入和吹出)10-20次,使组织分散为细胞。将分散的细胞经2—3层消毒纱布过滤,取滤液置于医用离心机中以1500转/分离心十分钟,弃去上清液,加适昆乳汉液混匀,再次通过离心机离心,最后加入乳汉液使细胞悬浮其中,收集于灭菌三角瓶中。

3.细胞计数和分装:取已制好的细胞悬浮液,用计数白细胞的方法计数,根据计数结果,用营养液(pH6.8—7.0)稀释为每毫升含50-60万细胞,分装于小扁瓶中(容量约50毫升的扁瓶加悬液约5毫升),也可分装在链霉素小瓶中。

4.培养:在37℃培养,3—4天即可粘附瓶壁形成单层细胞,以后每过3—4大更换一次维持液。

5.接毒;将病料剪碎,按1:4加含双抗的汉克氏液研磨成乳糜状,经冻融处理使细胞破碎,病毒充分释放,用离心机,将转速控制在3000转/分左右离心15分钟,将上清液接种到已生长单层细胞的培养瓶中,在37℃温箱中吸附30-60分钟,然后加入维持液继续培养。

6.收获病毒:每日或隔日用低倍显微镜观察细胞病变情况,当有50-75%细胞出现病变队时可收集培养瓶中液体,从放在冰箱(-20℃)中保存,此即繁殖的病毒液。

注:培养皿及其他使用器具的洁净、离心机的使用、水的质量、酸碱度、无菌操作等,都是关系到组织培养成败的重要问题,必须严格规定的要求去做。

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